大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于免疫共沉淀技术支持的问题,于是小编就整理了4个相关介绍免疫共沉淀技术支持的解答,让我们一起看看吧。
1. 原理 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效
2. 准备工作 试剂:冷PBS,RIPA Buffer,细胞刮子(用保鲜膜包好后,埋冰下),离心机。 RIPA Buffer配制: 基础成分:Tris-HCl(缓冲液成分,
3. 实验流程 方案1: 1. 转染后24-48h可收获细胞,加入适量RIPA细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30min,细胞裂解液于4°C
简单的说IP就是用抗体把你要的蛋白免疫沉淀下来,然后去检测它。例如蛋白A在细胞内的蛋白量不同,或者有着不同的翻译后修饰,这是可以用A蛋白的抗体+prorein A beads来IP,从细胞中把A拉下,再用特异的抗体(如磷酸化,泛素化抗体)来检测A的变化。
而co-ip的原理是一样的,自是它检测的是和A相互作用的蛋白,也就是说用A的抗体把A拉下来后,用和A相互作用蛋白B的抗体去检测,来证明A和B之间的相互作用。 拓展资料: 免疫沉淀的实验步骤:
(1)收获细胞,加入适量细胞IP裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上或者4℃裂解30min, 12,000g离心30 min后取上清;
(2)取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50 μl protein A/G-beads加入到细胞裂解液,4°C缓慢摇晃孵育过夜;
(3)免疫沉淀反应后,在4°C 以3,000 g速度离心5 min,将protein A/G-beads离心至管底;将上清小心吸去,protein A/G-beads用1ml裂解缓冲液洗3-4次;最后加入15μl的2×SDS 加样缓冲液,沸水煮10分钟;
(4)SDS-P***E, Western blotting或进行质谱分析。 :免疫共沉淀词条
1.具有(或近期即将获得)细胞生物学等专业的博士学位,接受过良好的博士或博士后训练。具有扎实的细胞生物学、生物物理学、生物化学等相关学科的理论基础,有过良好的科研训练和较强的研究背景,并在国际期刊上发表过相关研究论文。
2.能独立开展细胞生物学方面的研究工作,具有熟练的细胞生物学和分子生物学实验技能,如细胞培养、细胞活力分析、细胞成像、分子克隆和免疫共沉淀等实验技术。
3.具有细胞内膜转运机制或细胞氧化应激功能等方面研究经验者优先。
5.热爱并有志从事基础性生命科学研究,富有独立性、创造性、责任心和团队协作精神,善于沟通,对待科研积极主动,具有较强的独立开展科研工作的能力。
将两种因子A和B分别做基因沉默,沉默A gene 看看A和B表达的情况,然后沉默B gene 再看看A和B表达的情况。
上游的因子被沉默表达后,下游的因子肯定表达下调或不表达。而下游因子被沉默表达后,上游因子的表达不会受影响。还可以做个免疫共沉淀,看看上游因子是不是直接结合(作用)于下游因子的基因启动子区,开启下游表达。如若不是,可能另有其他的环节在中间过程。
到此,以上就是小编对于免疫共沉淀技术支持的问题就介绍到这了,希望介绍关于免疫共沉淀技术支持的4点解答对大家有用。
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